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https://doi.org/10.14943/doctoral.k15654

https://hdl.handle.net/2115/97051

Precursor-targeted immune-mediated anemia (PIMA)に対する脾臓摘出術の臨床的有用性および分子生物学的変化に関する研究

日本語

2023-09-25

Hokkaido University

v, 71 p.

慢性的に⾮再⽣性貧⾎を呈する⽝の⾻髄像の⼀つとして、⾚芽球過形成や成熟停⽌を特徴とする無効造⾎が報告されている。このような症例に対する詳細な病態解明はなされていないものの、免疫抑制療法が⼀定の効果を⽰すことから免疫異常がその原因であると推測されている。従来、本疾患は⾮再⽣性貧⾎に加え免疫介在性溶⾎性貧⾎(Immune-mediated hemolytic anemia, IMHA)に特徴的な臨床検査所⾒を有する症例が⼀定数存在したことから、⾮再⽣性免疫介在性貧⾎(Non-regenerative immune-mediated anemia, NRIMA)と定義されていた。⼀⽅、IMHA の所⾒に乏しい⾮再⽣性貧⾎のみを呈した⽝ではマクロファージによる⾚芽球貪⾷像が⾼頻度に観察されるという知⾒に基づき、⾚⾎球前駆細胞に対する免疫異常に限定したprecursor-targeted immune-mediated anemia (PIMA)という疾患概念が近年提唱された。現時点でPIMAは主に⾚芽球に対する免疫反応、NRIMAは⾚芽球から⾚⾎球まで幅広い分化段階に対する免疫反応と理解されている。本研究では近年提唱された診断基準に従いPIMAと診断された症例を対象に研究を⾏った。 　過去の報告では、PIMA/NRIMA罹患⽝は免疫抑制療法により50−88％が中央値14−31⽇までに⾚⾎球再⽣像が認められ、このうち半数以上が寛解を達成したとされている。しかしながら、これらの報告には免疫抑制療法が奏功せず、3ヶ⽉以内に安楽死された⽝も多く含まれており、⻑期間治療を継続した場合の予後については情報が不⾜している。⼀⽅、⻑期間の免疫抑制療法の実施は、合併症や副作⽤の問題、さらには通院回数の増加や複数回の輸⾎に伴うオーナーの経済的な負担の増⼤など多くの問題があることは否定できない。このような観点から、北海道⼤学動物医療センターでは、免疫抑制療法に反応を⽰さないPIMA症例に対して、代替療法として脾臓摘出術（脾摘）を実施し、⼀定の効果を経験してきた。本研究はPIMAの治療法として脾摘に焦点を当て、①従来の免疫抑制療法と脾摘の臨床成績を検討すること、②脾摘前後の⾎清蛋⽩質の変化および脾臓における遺伝⼦発現について網羅的に検討することを⽬的とした。 　第1章では、従来の治療法である免疫抑制療法への反応性や有害事象に着⽬し、PIMA罹患⽝において3ヶ⽉以上治療を継続した症例に限定して治療効果に影響を与える因⼦と治療反応を⽰すまでに要する期間を回顧的に調査した。その結果、Erythroid-maturation ratio(EMR)が0.17未満であることは、治療反応に対する正の予後予測因⼦である可能性が⽰され、60⽇以上治療を継続した場合に⾮反応群から反応群へと移⾏する症例はわずかであることが明らかとなった。さらに、PIMA 罹患⽝全症例で免疫抑制療法の有害事象を調査したところ、膵炎および肺炎は全治療期間にわたり発⽣し、膿瘍などの感染症は免疫抑制療法を⻑期間⾏っている⽝でより多く発⽣する傾向が⽰された。 　第2章ではPIMA罹患⽝に対する脾摘の有効性を回顧的に調査した。脾摘を実施した20頭中、18頭で⻑期的な経過観察が可能であった。18頭中15頭は術後、免疫抑制療法の中⽌および輸⾎依存の離脱が出来、治療が奏功したと考えられた。また、術後観察期間(中央値301⽇)で脾臓摘出術の合併症は認められなかった。これらの結果から、⽝が免疫抑制療法に反応しない場合、脾摘がPIMAに対する有効な治療戦略である可能性が⽰された。 　第3章では、PIMA罹患⽝と健常⽝の脾臓におけるトランスクリプトーム解析およびPIMA罹患⽝の脾摘前後の⾎清中蛋⽩質を網羅的に解析した。PIMA罹患⽝の脾臓では1,385の発現変動遺伝⼦が検出され、炎症関連タンパク質であるS100A12、S100A8、S100A9 などの707遺伝⼦の発現が対象と⽐べて⾼い値であった。さらに、免疫組織化学的⼿法により、PIMA発症⽝ではS100A8/A9蛋⽩質の発現量が健常⽝に⽐べ有意に⾼いことが確認された。⾎清プロテオーム解析では、脾摘前後の同⼀個体のサンプル間で22種の蛋⽩質発現に有意差が認められ、パスウェイ解析により脾摘前のレクチン経路を主とした補体活性化が⽰唆された。 　本研究により、PIMAの治療に対する知⾒として、60⽇以上にわたる免疫抑制療法に反応を⽰さない場合は有害事象発⽣の観点から積極的な代替療法の考慮が望まれることが明らかとなった。その代替療法として、脾摘は奏効率が⾼く、⻑期的な予後が期待できる有効な治療法となり得ることが回顧的研究により⽰された。さらに脾臓を⽤いた網羅的な遺伝⼦解析や脾摘前・後の⾎清を⽤いた⾎清中蛋⽩質の網羅的解析によりS100A8/A9の過剰発現や脾摘前におけるレクチン経路の活性化がPIMAの病態に関与している可能性が⽰された。

2023-09-25

甲第15654号

博士(獣医学)

(主査) 教授 稲葉 睦, 教授 滝口 満喜, 准教授 中村 健介, 准教授 山﨑 淳平, 准教授 森下 啓太郎

獣医学院(獣医学専攻)

博士論文

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